操作步驟:
1、打開PCR儀的熱蓋,插入0.2ml的樣品管。蓋好熱蓋。
2、打開PCR儀的電源,儀器程序開始初始化,需等待幾分鐘。
3、初始化完成后,顯示主菜單:
4、點“Browse/New Methods”,進入PCR程序列表:
6、添加一段程序:點中上方的“Stage”位置,該位置變紅;再點“Add”,軟件將加入一段新的程序。
8、增加一個步驟:點“Step”位置,該位置變紅;再點“Add”,軟件將加入一個新的步驟。
9、刪除一個步驟:點“Step”位置,在點“Delete”,軟件將該步驟刪除。
1)點中一個步驟,再點“Option”鍵,出現選項如下
2)點“VeriFlex step”,出現梯度創建窗口:
輸入6個梯度溫度,溫度下方的“1-2”是指對應的1、2兩行加熱孔,全部輸好后,點“Done”確定。注意:相鄰的兩個梯度溫度之差最大不能超過5℃!
11、建立漸變模式:
1)點中一個步驟,再點“Option”鍵,出現選項如下
2)點“Auto Delta”,出現漸變模式創建窗口。
點“Staring Cycle”,輸入起始循環數;點“Delta Temperature”,輸入溫度變化值;點“Delta Time”,輸入時間變化值。漸變模式適用于touchdown PCR,可以提高PCR反應的特異性。例:輸入起始循環數為2,溫度變化值為+0.5℃,時間變化值為+5s,則表示從第2個循環開始,每循環一次升溫0.5℃,時間增加5s。
1)點中一個步驟,再點“Option”鍵,出現選項如下
輸入暫停的起始位置,暫停間隔和暫停時間,點“Done”確定。上圖表示每隔10個循環暫停10s,在10個循環的第1個循環之前暫停。
13、編輯PCR程序完成后,點“Save”保存。
14、回到PCR程序列表界面,選擇新建的PCR程序。
輸入反應體積和熱蓋溫度,點“Start Run Now”開始運行PCR程序。
16、儀器運行選中的PCR程序,顯示運行監視窗口
A- 運行狀態欄,顯示運行溫度和剩余時間
B- 加熱警示標記
C- 階段指示
D- 步驟溫度
E- 步驟時間
F- 步驟指示
C- 狀態報告,顯示日期、時間和儀器狀態
D- 延伸箭頭,點箭頭可以顯示更多的步驟
“Remaining Time”顯示暫停剩余時間,“Elapse Time”顯示已暫停時間。 如果需要修改暫停時間,點 ,輸入時間值,點“Done”確定;點“Resume Run”, 結束暫停,繼續運行PCR程序。 7、終止運行:點“Stop”可以終止整個PCR程序。 18、反應報告: PCR程序結束后,儀器會自動生成反應報告,顯示當次反應的各項指數。該報告可以保存和打印。 19、PCR反應結束后,打開熱蓋,取出樣品,關閉儀器電源。并開蓋放置,使熱蓋和加熱模塊正常降溫